コンピテントセルの調製　(エレクトロポレーション)


-お好みの大腸菌をLBに植菌、37°Cで一晩培養
-100 mL のLBに植継ぎ、OD600が0.5-0.8になるまで37°Cで培養
-50 mLのファルコンチューブ2本に培地を移し、15分間氷冷後に集菌 (2500g, 10 min, 4℃)
-ミリQを5 mlLずつ加え、穏やかに振盪 (ボルテックスやピペッティングによる懸濁は避ける)し懸濁。さらにミリQを45mLずつ加える
-集菌 (2500g, 10min, 4℃)、上静を捨てる
ペレットがでろでろで崩れやすいので注意。多少のロスは無視する
-ミリQを25mLずつ加え懸濁
-集菌 (2500g, 10min, 4℃)
-上清を捨て、２mLずつの10%グリセロールで懸濁
-集菌 (2500g, 10min, 4℃)
-1mLずつの10%グリセロールで懸濁し、100 μlずつエッペンチューブに分注
-液体窒素で急速凍結し、-80°Cで保存

ミリQ、10%グリセロールはオートクレーブ滅菌したものを用いる